لینک پرداخت و دانلود *پایین مطلب*
فرمت فایل:Word (قابل ویرایش و آماده پرینت)
تعداد صفحه13
مطالعه شناسایی Pseudomonas syringae در خاک و گیاه با استفاده از روش تشخیص مستقیم توسط PCR
مصطفی نیک نژاد کاظم پور
گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی دانشگاه گیلان
در این تحقیق شناسایی Pseudomonas syringae بوسیله روش مستقیم PCR روی بافتهای زنده گیاهی، بقایای خشک گیاهی و خاک انجام گرفت. بدین منظور از گیاهان آلوده خاک و بقایای گیاهی آلوده به باکتری که یکسال از جدا کردن گیاهان آلوده به P. syringae می گذشت نمونه برداری انجام شد. نمونه ها در پلاستیک استوماشر محتوی 2 میلی لیتر بافر PBS قرار داده شدند. از نمونه ها عصاره گیری به عمل آمده و سپس DNA سلولهای باکتری خالص سازی شدند. پنج میکرولیتر از DNA خالص شده و 5 میکرولیتر ماده Gen Releser به لوله های اپندورف منتقل شده و عمل PCR به تعداد یک سیکل انجام گردید. بلافاصله DNA باکتری توسط آغازگرهای اختصاصی HrpL1 و HrpL2 مجددا عمل PCR به تعداد 37 سیکل تحت برنامه مخصوص انجام گرفت. DNA سلولهای باکتریهای تکثیر شده روی ژل الکتروفورز منتقل شدند. تمامی نمونه ها تشکیل یک باند DNA با اندازه 600 جفت باز نشان دادند که با شاهد مثبت کاملا مطابقت داشت. جهت تائید نتایج، DNA تکثیر شده با آنزیم برش Bsh 12361 هضم گردیدند و مجددا روی ژل الکتروفورز منتقل شدند. باندهای ایجاد شده روی ژل با باندهای شاهد مثبت کاملا مطابقت داشت. نتایج این تحقیق بوضوح مشخص نمود که سلولهای P.syringae قادرند بیش از یکسال در خاک و بقایای گیاهی دوام داشته و از سالی به سال دیگر منتقل شوند.
Identification of Pseudomonas syringae in soil and plant materials by direct PCR
M. Niknejad Kazempour Department of Plant Pathology Faculty of Agricultural Sciences, Guilan University
In this research, identification of Pseudomonas syringae on plant tissue, debris and soil by direct PCR method was examined. Soil and plant material contaminated by P.syringae for one year was collected. The samples were placed in stomacher plastics containing 2 ml PBS buffer. Extracts were prepared and the DNA was isolated. 5 μl of purified DNA was added to 5 μl of Gen Relesor in eppendorf tubes and a single cycle was carried. This was followed immediately by a 37 cyle PCR using the HrpL1 and HrpL2 primers. The DNA from PCR was electrophoresed and showed 600 pb fragment identical to the positive control. To verify this results, the amplified DNA was digested by restriction enzyme of Bsh 12361. The banding pattern attained correlated with those obtained for the positive control. The results obtained clearly demonstrate that P.syringae is capable sustaining itself for at least one year in soil and plant material and can be transmitted from one year to the next.
تحقیق در مورد مطالعه شناسایی Pseudomonas syringae در خاک و گیاه با استفاده از روش تشخیص مستقیم توسط PCR