دانلود مقاله حفاظت و ایمنی تجهیزات شبکه های توزیع و لوازم مصرف کنندگان در مواقع رفتار غیرعادی شبکه

اختصاصی از فی ژوو دانلود مقاله حفاظت و ایمنی تجهیزات شبکه های توزیع و لوازم مصرف کنندگان در مواقع رفتار غیرعادی شبکه دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

این فایل به صورت PDF بوده و غیرقابل ویرایش می باشد.
تعداد صفحه: 12

لازم به ذکر است قیمت این مقاله در سایت سیویلیکا 30000 ریال می باشد.

خلاصه مقاله:

حوادث و اتفاقات شبکه توزیع و اثر انحرافات ولتاژ بر روی لوازم برقی مشترکین مورد بحث قرار گرفته و راهنمایی لازم به مسئولین نگهداری شبکه در صنعت برق پیشنهاد گردبده تا در رفع حوادث و اتفاقات و تامین سرویس منظم و مرتب به مشترکین برق با مشکلی مواجه نشوند. و همچنین با رعایت اصول فنی و حفاظتی از امکانات موجود شبکه به طرز صحیح استفاده شده و علاوه بر اینکه عمر تاسیسات و لوازم طویل تر می گردد با برقراری سرویس دائمی هزینه تمام شده واحد انرژی به حداقل ممکن رسیده و از ضایعات انسانی و سرمایه گذاری های زائد جلوگیری شود.

ایمنی در برق

اختصاصی از فی ژوو ایمنی در برق دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

برق از جمله رشته های پرکاربرد در تمامی سطوح زندگی بشر است و زندگی بدون این نعمت الهی امروزه بسیار سخت به نطر میرسد ولی در عین حال این رشته از پرخطر ترین رشته هاست. بنابراین رعایت اصول ایمنی در برق جزو الزامات اصلی این حوزه میباشد.

دانلودمقاله حفاظت و ایمنی در ازمایشگاه

اختصاصی از فی ژوو دانلودمقاله حفاظت و ایمنی در ازمایشگاه دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

حفاظت چیست؟
کلمه حفاظت برای افراد مختلف معانی مختلفی دارد، از دید یک دانشمند «Scientist» انجام صحیح یک آزمایش و تجربه است. از دید یک مهندس سازنده، حفاظت یکی از فاکتورهای اساسی برای گسترس و انجام یک تولید است. یک مسئول دولتی وقتی که به یک پروژه توجه می‌کند از دیدگاههای مختلفی حفاظت را موردنظر قرار می‌دهد.
بنابراین کلمه «Safety» و اینکه یک محل چقدر حفاظت شده است مطلق نیست. اگر یک عملی به طور عادی از هر گونه خطری عاری باشد می‌گوئیم آن کار Safe‌ یا «بی‌خطر» است. وقتی احتمال خطر در یک کاری کم باشد ممکن است آن را «احتمالا بی‌خطر» نامید زیرا برای هیچ کاری مطلق نداشتن حادثه غیرممکن است.
بی‌خطر بودن، همچنین قبول ریسک را نیز با خود دارد. ممکن است کاری برای کسی قابل قبول باشد و برای دیگری غیرقابل قبول.

سازمان‌دهی حفاظت و ایمنی
برای هر مرکز پزشکی اعم از بیمارستان، پلی‌کلینیک و یا آزمایشگاه داشتن یک برنامه مدون «اصول حفاظت و ایمنی» از اهم واجبات است و برای شناسایی خطرات ناشی از کار و ایمنی دربارة هر یک از آنها باید تمام کوششهای لازم به عمل آید و سازمانی متناسب با وسعت هر مؤسسه‌ای تشکیل گردد.
نخستین مرحله کار برنامه‌ریزی دقیق برای آن است و تشکیل «کمیته ایمنی» از اولویت خاصی برخوردار است.

کمیته ایمنی
کمیته ایمنی معمولا از تعداد 5 تا 10 نفر (بسته به وسعت بیمارستان یا آزمایشگاه) از کارمندان با تجربه بخشهای مختلف تشکیل می‌شود و یک فرد مسئول به عنوان «افسر ایمنی» که در مقابل رئیس بیمارستان یا آزمایشگاه مسئول است به عنوان دبیر کمیته انتخاب می‌گردد. در یک بیمارستان بزرگ بیش از دویست تختخوابی و یا مؤسسات تحقیقاتی و دانشگاهها و آزمایشگاهها بهتر است این فرد دارای درجه مهندسی بهداشت باشد، یک میکروب‌شناس و یا یکی از کارشناسان آزمایشگاه و نمایندگانی از قسمت اداری باید عضویت این کمیته را دارا باشند. در صورت نیاز باید نمایندگانی از سازمان‌های آتش‌نشانی، سازمان انرژی اتمی، اداره کل بهداشت محیط، اداره کل بهداشت حرفه‌ای و سازمان حفاظت محیط زیست و ... بصورت مشاور در جلسات کمیته که حداقل هر دو ماه یک بار باید تشکیل شود شرکت کنند.
در یک آزمایشگاه کوچک می‌توان این وظیفه را به سوپروایزر و یا یک تکنیسین مجرب به عنوان کار اضافی محول نمود.
مسئول کمیته ایمنی باید فردی مجرب، خونسرد، و کاردان باشد و اطلاعات لازم را قبل از احراز پست سازمانی، فرا گیرد.

وظایف کمیته ایمنی عبارت است از:
1- ایجاد امکان کار کردن افراد در یک محیط حفاظت شده و ایمن.
2- تهیه یک جزوه راهنما برای رعایت نکات ایمنی و تعیین سیاست و روشهای ایمنی در آن سازمان.
3- دریافت گزارش کلیه حوادث ناشی از کار و تجزیه و تحلیل آن حوادث.
4- بازرسی‌های مداوم از شرایط کار و اعمال سیاست‌های تنبیهی دربارة افرادیکه رعایت اصول ایمنی را نمی‌نمایند.
5- تجدیدنظر در سیاستهای ایمنی در صورت لزوم و اعلام آن به همه کارکنان مؤسسه. این امر ممکن است به وسیلة یک گروه منتخب از طرف کمیته ایمنی برای تدوین سیاستهای جدید و پیشنهاد آن به کمیته ایمنی عملی شود.
6- تهیه و تدوین روشهای لازم برای آموزش اصول ایمنی از طریق تهیه پوستر، ویدئو تیپ و نظایر آن.
7- در بخشهای تحقیقاتی در صورتی که محققی خواسته باشد با یک ماده شیمیایی جدید و یا یک میکروارگانیسم جدید کارهای تحقیقاتی تازه‌ای انجام دهد، قبل از انجام هر گونه کارهای تحقیقاتی باید مراتب را به کمیته ایمنی گزارش نماید تا معیارهای حفاظتی کارکنان بخش و محیط کار برای آن ماده و یا میکروارگانیسم مخصوص مشخص گردد.
8- کلیه مسئولان بخش‌ها، روساء دپارتمان‌های مختلف، سوپروایزرها برای رعایت مقررات ایمنی، در مقابل کمیته ایمنی مسئولیت مستقیم دارند و کلیه کارکنان موظف به قبول مسئولیت‌های خود در این باره و ادامه آن در تمام مراحل کار می‌باشند.
9- کمیته ایمنی و مدیران سازمان موظف‌اند کلیه امکانات کمکهای اولیه را برای کارمندان خود بر طبق استانداردهای بین‌المللی فراهم نمایند.
10- برای موارد فوری و اضطراری کمیته ایمنی موظفا باید یک سو کمیته اضطراری EMERGENCY SUB COMMITTEE تشکیل دهد. نام، مشخصات، آدرس و شماره تلفن گروه کمیته اضطراری باید مشخص و در دسترس همه کارکنان باشد و هر زمان باید مسئولیت دایمی و موظف بعهده یکی از اعضا گروه محول شود «ON CALL» و این فرد در تمام موارد چه در محل کار و یا منزل باید با مسئولان و کارکنان شیفت‌های مختلف سازمان خود در تماس باشد و چه بهتر که از سیستم‌های مخابراتی قابل حمل و نقل استفاده شود.
کمیته اضطراری باید برای موارد خطر فوری مانند آتش‌سوزی، زمین لرزه، و نظایر آن برنامه‌ریزی کند و هر از گاهی کارکنان مؤسسه را به طور اتفاقی برای مواجه با خطر آزمایش کند.

ساختمان آزمایشگاه در رابطه با اصول حفاظتی
ساختمان آزمایشگاه بر حسب آنکه برای چه نوع فعالیتی مورد استفاده قرار خواهد داشت متفاوت است. مثلا آزمایشگاههایی که صرفا برای یک کار تشخیص معمولی مورد استفاده است با آزمایشگاهی که برای یک کار تحقیقاتی با یک میکروارگانیسم خطرناک کار می‌کند از نظر ساختمان، وسایل حفاظتی و ایمنی کاملا فرق دارد. سازمان بهداشت جهانی آزمایشگاهها را از این نظر به سه گروه زیر تقسیم کرده است:
آزمایشگاههای معمولی Basic
آزمایشگاههای حفاظت شده
آزمایشگاههای شدیدا حفاظت شده

مقررات عمومی برای حفاظت افراد
1- محافظت شخصی
1-1: استفاده از دهان برای کشیدن مواد مختلف به وسیلة پی‌پت اکیدا باید ممنوع گردد امروز وسایل مختلفی برای برداشتن نمونه مانند سمپلر، پی‌پت‌های اتوماتیک و نظایر آن وجود دارد که باید در آزمایشگاهها و مراکز پزشکی از آنها استفاده شود. به خصوص استفاده از پی‌پت دهانی برای کشیدن مواد اسیدی، بازها و دیگر مواد سوزان خطرناک است.

2- کشیدن سیگار در محل کار بدلایل چندی ممنوع است
1-2: سیگار روشن یک منبع احتراق برای مواد قابل اشتعال است.
2-2: دود سیگار یا پیپ اشکالات فراوانی در کاربرد بعضی از وسایل بوجود می‌آورد، برداشتن سیگار از روی میزکار و گذاشتن بر روی لبها راهی برای آلوده شدن افراد به میکرب‌ها و مواد سمی است.
3-2: پراکنده شدن خاکستر سیگار روی وسایل الکترونیک و میکروسکوپ تأثیر بسیار سویی باقی می‌گذارد.

3- خوردن و آشامیدن
خوردن و آشامیدن در منطقه کار ممنوع است. نمونه‌های آزمایشی مانند خون، ادرار و مدفوع، خلط و... محتوی تعداد زیادی میکربهای بیماری‌زا هستند که بر روی میزهای آزمایشگاهی قرار گرفته و یا در یخچال قرار داده می‌شوند، گذاشتن غذا و آشامیدنی‌ها در یخچالی که نمونه‌های آزمایشگاهی مواد بیولوژیک و مواد شیمیایی در آن جا داده می‌شود قدغن است.
در بیمارستانها و آزمایشگاهها لازم است یک یخچال مخصوص گذاشتن مواد غذایی کارمندان اختصاص داده شود تا از آلوده شدن مواد غذایی جلوگیری شود.

4- روپوش و لباسهای محافظ
یونیفورم‌های سنتی برای کارمندان آزمایشگاه یک روپوش و یا کت سفیدی است که بر روی لباس معمولی پوشیده می‌شود، برای خانمها روپوش و شلوار و برای آقایان بلوز و شلوار بسیار مناسب است.
یونیفورم‌ها معمولا با علامت مشخص هر سازمان (I.D.Badge) تکمیل می‌گردد.
از پوشیدن یونیفورم‌ها با پارچه‌های مصنوعی استات باید حتی‌المقدور خودداری شود زیرا این نوع پارچه‌ها بشدت قابل اشتعال هستند.
لباسهای محافظ مانند پیش دامن، دستکش، ماسک، عینک‌های محافظ و کفشهای کاغذی یکبار مصرف باید در اختیار کارکنان قرار گیرد تا در مواقع ضروری بر روی یونیفورم‌ها پوشیده شود.
مثلا استفاده از روپوش و دستکش برای تقسیم نمونه‌ها، روپوش، دستکش و ماسک در آزمایشگاههای میکروباکتریولوژی، عینک‌های محافظ برای کار با مواد اسیدی و قلیایی ضروری است.

5- لنز چشمی CONTACT LENSES
بسیاری از کارمندان و بخصوص خانمها به جای عینک از لنز استفاده می‌کنند، بعضی از لنزها بخصوص نوع نرم آن جاذب انواع حلالها هستند و همچنین در موارد پاشیده شدن مواد اسیدی و قلیایی و اسپری کردن بعضی مواد ممکن است سبب بروز حوادث ناگواری برای چشم شود، افرادی که از لنز استفاده می‌کنند در صورت مواجه شدن با خطر تا بخواهند لنز را از چشم خود خارج کنند ممکن است آسیبی به چشم خود وارد سازند به همین جهت اکیدا توصیه می‌شود که از بکار بردن لنز در موقع کار در آزمایشگاه خودداری و فقط از عینک استفاده شود.

6- پوششهای دیگر و آرایش
کفش‌ها باید راحت و با ته لاستیکی باشد و سطح پا را بپوشاند (بندی یا راحتی) در هنگام کار در آزمایشگاه از پوشیدن کفشهای جلوباز و یا سوراخ‌دار باید اجتناب شود.
موهای بلند باید بطور کامل در پشت سر جمع شود و دور از شانه‌ها قرار گیرد، تا از تماس با مواد آزمایشی و تماس روی میزها و افشاندن میکروارگانیسم‌ها در محیط کار جلوگیری شود، روسری‌های بهداشتی برای استفاده در موقع کار مناسب است. هنگام استفاده از روسری‌های معمولی باید دقت شود که آویزه‌های روسری با میز محل کار و یا نمونه‌ها تماس نداشته باشد. هنگام استفاده از مقنعه نیز باید دقت شود که با تعبیه یک جادکمه بر روی لباس، کناره‌های مقنعه به آن متصل شود تا از آویزان شدن آن هنگام کار، تماس با بیمار و یا مواد آزمایشی جلوگیری به عمل آید.
ناخنهای بلند، بخصوص وقتی که در تمیز کردن و نگهداری آنها دقت نشود برای پرستاران، بانوان و کارمندان آزمایشگاه مشکل‌آفرین است و باید مراقبت کامل در تمیز نگهداشتن آنها مبذول گردد.
هنگام کار نباید از زیورآلات آویز مانند دستبند، گردنبندهای بلند که ممکن است با روی میز آزمایشگاه تماس پیدا کند، استفاده شود.

7- شستشوی دست
در طی کار روزانه دستها باید مرتبا شسته شود، هنگامی که دستکش را از دست خارج می‌کنید و قبل از ترک آزمایشگاه قبل و بعد از تماس با بیمار و قبل از خوردن باید دستها شسته شوند.
استفاده از برسهای مخصوص برای تمیز کردن زیر ناخن بخصوص برای خانمها توصیه می‌شود.

8- راه خروج و کریدورها
1- راههای خروج و کریدورها نباید به هیچ وجه به وسیلة وسایل مختلف مسدود گردد. هیچ‌گونه لوازمی مانند نیمکتها، صندلی‌ها و یا جا آشغالی نباید سبب انسداد راههای خروج گردد.
2- صندلی‌های چرخدار و برانکار بیماران باید طوری قرار گیرند که سبب مسدود شدن راههای خروجی نشوند.
3- درب بخشها و آزمایشگاه نباید مسدود و یا قفل باشد و هیچگاه نباید در مسیر آن راه‌بندان بوجود آید.

وسایل
1- وسایل شیشه‌ای
1-1: هیچ‌گاه وسایل شیشه‌ای شکسته یا لب پریده را مورد استفاده قرار ندهید بلکه آنها را در ظرف جداگانه‌ای دور بریزید، توجه کنید که قرار دادن وسایل شیشه‌ای شکسته و آشغالها و خرده کاغذها در یک ظرف جاآشغالی و یا کیسه‌های زباله برای پرسنل تمیزکار ایجاد خطر خواهد کرد.
2-1: هیچ گاه قسمت بالایی پی‌پت‌های مصرف شده را در داخل فلاسک و یا بشر قرار ندهید.
3-1: کوشش نکنید که با وارد کردن فشار درب شیشه‌ای را که چسبیده است باز کنید.
4-1: در صورتی که احتمال آلودگی وسایل شیشه‌ای به نمونه‌هایی که ممکن است مربوط به بیمار هپاتیتی باشد می‌رود آنها را در داخل ظرف محتوی محلول سدیم هیپوکلریت 500 میلیگرم در لیتر یا محلول کلردار آزاد حداقل به مدت ده دقیقه قرار دهید.
5-1: وسایل شیشه‌ای داغ مانند بشرهایی که برای محیط سازی به کار می‌برید و تا لوله‌های آزمایشی که در روی شعله می‌گیرید را فقط با دستکشهای آمپرمابل مقاوم و یا لاستیکهای سیلیکونی به دست بگیرید.

2- سانتریفوژ
1-2: هیچ گاه سانتریفوژها را بدون درب بسته به کار نیندازید، دقت کنید که هنگام کار در کنار سانتریفوژ گیسوهای بلند، ریشهای بلند، کراوات، روبان موی سر و یا سایر وسایلی که به خود آویزان کرده‌اید در کنار درب سانتریفوژ گیر نکند.
2-2: هیچ گاه نمونه‌هایی مانند خون، ادرار، خلط و نظایر آن و یا مواد قابل اشتعال را در لوله‌های فاقد درپوش سانتریفوژ نکنید، سانتریفوژ کردن در محیط خلاء تولید کرده و قسمتی از مایع را تبخیر می‌کند. مواد عفونی نیز به صورت ذرات میکربی در محیط سانتریفوژ پراکنده می‌گردد و مایعات قابل اشتعال ممکن است به صورت بمبی درآید باید درب لوله‌ها را با پارافین یا درپوشهای پلاستیکی یا تلفن پوشاند و یا از شیشه‌های درپیچ‌دار استفاده کرد.

3- اتوکلاو
1-3: هیچ گاه قبل از کنترل کامل اتوکلاو را به کار نیندازید.
2-3: هیچ گاه قبل از آنکه حرارت و فشار اتوکلاو به حالت عادی خود برگشته باشد آنرا باز نکنید.
3-3: مطمئن باشید که دریچه اطمینان بخار قبل از باز کردن به حالت off باشد.
4-3: برای گذاشتن و برداشتن وسایل در اتوکلاو همراه از دستکش مخصوصی استفاده کنید، زیرا درب و اطراف اتوکلاو ممکن است داغ باشد.
5-3: همواره درب ظروفی را که داخل اتوکلاو می‌گذارید کمی شل کنید که قسمتی از فشار وارد به محتوی ظرف به خارج برود، این عمل از انفجار و ترکیدن ظروف در داخل اتوکلاو جلوگیری می‌کند.

4- مواد قابل کنترل
در بخشهای بیمارستانی و آزمایشگاهی ممکن است مواد مختلفی که از نظر قانونی داشتن و نگهداری آنها مستلزم اجازه مخصوص است وجود داشته باشد. مواد مخدر، بعضی از مواد سمی، باربیتوراتها، مواد سیانوری و نظایر آن باید در جای مخصوص نگهداری و فقط با اجازة فرد مسئولی که قانون به او اجازه استفاده از آنرا داده است خارج شود چنین موادی باید از طریق رئیس بخش یا رئیس آزمایشگاه با دریافت رسید در اختیار فرد مسئولی که می‌تواند از آن استفاده کند قرار گیرد. این چنین مواد باید در دفتر مخصوصی ثبت و موارد مصرف آن با ذکر تاریخ مشخص شود.

جلوگیری از خطرات ناشسی از هپاتیت و HIV
اشاعه بیماری AIDS (Acquired Immune Deficiency Syndrome) در جهان، خطرات عفونتهای ناشی از ویروس را افزایش داده است، گر چه خوشبختانه هنوز خطر آنچنانی از این بابت کشور ما را تهدید نمی‌کند، ولی آگاهی از اصول حفاظت و ایمنی در مقابله با این ویروسها برای همه کارکنان مراکز بهداشتی و آزمایشگاهی ضروری است.
نام هپاتیت ویروسی به یک سری از بیماری‌های مشابهی اطلاق می‌شود که عامل بیماری و راههای اپیدمی آنها با هم فرق دارند و کاملا شناخته شده می‌باشند.
دو نوع از این یرقانها، هپاتیت A (که سابقا تحت عنوان هپاتیت عفونی) و هپاتیت B (که سابقا به نام هپاتیت سرمی) نامیده می‌شدند از سال 1940 به عنوان دو نوع بیماری شناخته شده است. نوع سوم هپاتیتها به نام non-A- mon B (NANB) معروف شده‌اند و دو نوع مجزای ویروس نیز از آن مشخص گردیده است، (انواع دیگر هپاتیتها شامل دلتاهپاتیت یا هپاتیت D و هپاتیت C (HCV) است.
خطر ویروس هپاتیت B (HBV) به عنوان یک عفونت منتقله از طریق خون مشخص گردیده و هر سال تعداد زیادی از کارکنان مراکز پزشکی را مبتلا می‌سازد به طوری که گزارش CDC نشان می‌دهد هر سال بیش از 12000 نفر از کارکنان مراکز پزشکی امریکا که با خون بیماران سرو کار دارند به این بیماری مبتلا می‌شوند.
ویروس HIV نیز از شخصی به شخص دیگر علاوه از طرق جنسی، از طریق استفاده از سرنگ و سوزن غیراستریل و یا وسایل تیز دیگری که به سبب جراحت پوست بدن شود منتقل می‌گردد. هر گونه جراحتی که به هر دلیل در پوست وجود داشته باشد می‌تواند راه خوبی برای ورود ویروس به بدن باشد.
در آزمایشگاه HBV و HIV از طریق خون، پلاسما، ترشح واژن می‌تواند منتقل گردد. سایر مواد بدن مانند مایع نخاع، مایع پلورال و نظایر آن نیز محتملا اگر با خون همراه باشند می‌توانند سب انتقال بیماری گردند.
این ویروس نسبت به حرارت بی‌نهایت حساس است و بعلاوه مقاومت آن در مقابل مواد شیمیایی ضدعفونی کننده بسیار کم است به همین جهت با استفاده از اتوکلاو (15 دقیقه در 121) حرارت خشک (برای وسایلی که خراب نمی‌شوند) در حرارت 170 (F340)، و یا جوشاندن به مدت 20 دقیقه می‌توان کلیه وسایل پزشکی را که احتمال انتقال ویروس از آن می‌رود استریل نمود.
در تمام بیمارستانها و مراکز پزشکی کلیه کارکنانی که به نحوی از انحاء با خون، مایع آمنیوتیک، مایع پریکاردیال و پلورال و مایع مفصلی، مایع نخاع، اسپرم و ترشحات واژینال سر و کار دارند باید دستورالعملهای احتیاطی را به کار بندند.
«احتیاط عمومی» شامل موادی مانند مدفوع، ترشح بینی، خلط، عرق، ادرار و مواد استفراغ شده نمی‌شود، همچنین این احتیاط شامل آب دهان نیز نیست مگر در موارد کار در دندانپزشکی که احتمالا ممکن است آب دهان با خون آمیخته شود.

مسئولیت و وظایف کارفرما در مقررات «احتیاط عمومی»
کلیة مسئولان بیمارستانها، آزمایشگاهها و مراکز پزشکی که نام کارفرما به آنها اطلاق می‌گردد دارای مسئولیت هستند و باید دستورالعملهای لازم را به شرح زیر رعایت کنند:
1- طبقه‌بندی شغل: هر یک از کارفرمایان و مسئولان باید بر اساس مقدار تماس کارمند با مواد بیماری‌زا مشاغل پزشکی را به سه گروه تقسیم کنند:
گروه I: افرادی که تماس مستقیم با خون و سایر مایعات بدن دارند که شامل مقررات «احتیاط عمومی» می‌گردد. چنین افرادی باید تمام وسایل شخصی برای حفاظت را هم در دسترس داشته باشند و هم استفاده کنند.
گروه II: افرادی که فعالیت آنها تماس با خون ندارد ولی در موارد اورژانس در تماس با خون یا مایعات دیگر خواهند بود. چنین افرادی باید وسایل حفاظتی را داشته باشند ولی فقط در موارد ضروری استفاده کنند.
گروه III: افرادی که وضع شغلی آنها هیچگونه تماسی با خون و یا سایر مایعات را پیش‌بینی نمی‌کند لزومی ندارد چنین افرادی وسایل حفاظتی در دسترس داشته باشند.
2- تدوین استاندارد برای روشهای کار: کارفرما باید روش تمام کارهای آزمایشی را که بنحوی در تماس با خون خواهد بود تدوین کند- کارمندان را با آموزش لازم به کارها و خطرات آن آشنا سازد- هیچ کارمندی مجبور به انجام کاری نیست که درباره آن آموزش لازم را ندیده باشد.
3- پیش بینی مسائل آموزشی و کارآموزی.
4- تجدیدنظر در ساختمان محل کار و آزمایشگاه برای جلوگیری از خطر آلودگی.

واکسیناسیون هپاتیت B
کلیه افرادی که شغل آنها ایجاب می‌کند که تماس با خون و یا سایر مایعات بدن داشته باشند باید با واکسن هپاتیت واکسینه شوند.

ضدعفونی و ضد آلودگی
برای جلوگیری از بروز عفونت مربوط به HBV و HIV دستورالعملهای زیر باید به طور روتین انجام گیرد:
1- دور ریختن وسایل تیز و سوزنها: تمام کارکنان باید احتیاط لازم را برای جلوگیری از زخمی شدن دست و انگشتان به وسیلة سوزن، اسکاپل، تیغ و دیگر وسایل تیز، هنگام کار و یا هنگام دور ریختن وسایل استفاده شده بعمل آورند. هیچگاه نباید سر سوزن را با دست خم کرد بلکه باید بلافاصله پس از استفاده سوزن و سرنگ را در جعبه مخصوص مقاوم در مقابل سوراخ شدن بیاندازند. این ظرف باید در محل نزدیک به مرکز نمونه‌برداری قرار داشته باشد، در آمبولانس و یا در صورت اجبار رفتن به بالین بیمار می‌توان از نمونه‌های کوچک این جعبه‌ها استفاده نمود- سوزن و سرنگ را در این جعبه‌ها انداخته و برای از بین بردن به قسمت مربوطه تحویل می‌دهند.
2- شستشوی دستها: درصورتی که دست و یا سایر قسمتهای بدن با خون و یا سایر مایعات مشکوک آلوده شده باشد بلافاصله باید دستها را شست (بهتر است همواره دستها را با آب گرم و صابون شستشو داد). اگر امکان شستشوی دست در محل نیست از آنتی سپتیک‌های خشک و یا حوله‌های آغشته به مواد ضدعفونی باید استفاده کرد.
3- تمیز کردن، ضدعفونی و استریلیزاسیون: کلیه وسایل و لوازم بر حسب مورد باید سوزانده – با اتوکلاو استریل و یا به وسیله مواد شیمیایی ضدعفونی گردند.
استریلیزاسیون: به معنی از بین بردن کلیه میکربها و اسپورها (مانند باسیلوس سوبتیلیس و کلستریدیوم تتانی و ...) است و ضدعفونی کردن شدید عبارت از از بین بردن میکربهاست ولی در صورتی که تعداد اسپورها زیاد باشد ممکن است همه آنها را از بین نبرد.
کلیه وسایلی که به طور مستقیم با پوست دست نخورده تماس داشته باشد (مانند استتوسکوپ) باید به طور معمولی از آلودگی‌های قابل رؤیت مبرا باشد- لازم است که این قبیل وسایل را هر از گاهی با آب و صابون شست و تمیز کرد.
وسایل پزشکی که پوست بدن را سوراخ کند (مانند سوزن- اسکالپل یا چاقوی جراحی و نظایر آن) پس از تماس با هر بیمار باید استریل شود.
استفاده از استریلیزاسیون خشک (Oven الکتریکی یا گازی) برای وسایلی که نمی‌توان اتوکلاو نمود به مدت دو ساعت در حرارت بالای (340 فارنهایت) مناسب است.
4- تمیز کردن و ضدآلودگی مواد مترشحه خونی: تمام لکه‌های خونی و یا موادی که ممکن است محتوی خون باشد بدقت باید با مواد ضدعفونی کننده قابل اعتماد تمیز شود. تمیزکننده باید دستکش به دست داشته باشد با یک حوله و یا حوله کاغذی ابتدای لکه‌های خون را بخوبی پاک کرده و سپس محل آلوده را با محلول ضدعفونی کننده بخوبی تمیز نماید. پس از خارج کردن دستکش باید دستها بدقت شسته شوند.
5- رختشویی: اگر چه ممکن است روپوش‌های کتانی و سایر البسه مورد استفاده در آزمایشگاه به وسیلة میکروارگانیسم‌ها آلوده شوند، خطر واقعی انتقال بیماری از این راه ناچیز است. وسایل رختشویی و ماشین رختشویی باید از طرف مسئولان سازمانها تهیه شود. با پودرهای رختشویی معمولی و دور کم می‌توان به شستن البسه اقدام نمود.

تعریف پایه
ارکان تشکیلات مدیریت پسماند
1- تولیدکنندگان پسماند (آزمایشگاه‌ها اعم از پزشکی، صنعتی و تحقیقاتی)
2- موسسات حمل و نقل پسماند
3- موسسات مجری برنامه دفع و انهدام پسماندها
تولیدکننده پسماند
به مرکزی اطلاق می‌گردد که فعالیتهای آن منجر به تولید پسماندهای خطرناک می‌شود که به سلامت انسان و محیط زیست لطمه وارد می‌سازد. مطابق با این تعریف ایجاد هر نوع پسماند خطرناک بدون توجه به مقدار یا نوع خاص آن سبب می‌گردد موسسه مسئول در این گروه قرار گیرد.

موسسات مجری برنامه آموزش و انهدام پسماند
این مراکز، برای بازیافت و انهدام پسماندها از روش‌هایی مانند دفن یا سوزاندن استفاده می‌نمایند، هر چند ممکن است بسته به نوع پسماند روش‌های دیگری را نیز جهت آزمایش و دفع به کار برند. علاوه بر آن، مسئولیت ثبت اسناد و ارائه گزارش برای حمل پسماند به حمل‌کننده‌ها و تایید اسناد مربوط به تحویل پسماند به مراکز دفع و انهدام را جهت ارائه به مراکز تولیدکننده نیز بر عهده دارند.
در حال حاضر سه نوع موسسه دفع و انهدام پسماند در کشور وجود دارد.
1- موسسات انهدام پسماندهای معمولی:
مجوز فعالیت این مراکز توسط شهرداری صادر می‌گردد و مسئولیت آنها، انهدام پسماندهای معمولی یا پسماندهایی است که پس از آزمایش می‌توان آنها را با پسماندهای معمولی دفع نمود.
2- موسسات آمایش پسماندهای عفونی:
پسماندهای عفونی پس از انتقال از مراکز تولید، جهت سوزاندن و در نهایت دفن نمودن، به این مراکز آورده می‌شوند. این مراکز موظفند مستندات مربوط به تولید پسماندهای عفونی در هر مرکز را که توسط موسسه حمل و نقل به آنها تحویل می‌گردد، تایید و یک نسخه از آن را مجددا توسط همان موسسه به مرکز تولیدکننده عودت دهند.
3- موسسات آمایش پسماندهای پرتوزا:
مسئولیت آمایش پسماندهای پرتوزا در حال حاضر بر عهده سازمان انرژی اتمی است و مراکز تولیدکننده این پسماندها موظفند مستندات مربوطه را با توجه به توصیه‌های سازمان آماده نمایند.

آمایش یا تصفیه (Treatment)
فرآیندی است که باعث کاهش تعداد میکروارگانیسم‌ها می‌شود تا حدی که توانایی ایجاد بیماری را نداشته باشند.
آلودگی‌زدایی (Decontamination)
شامل هر فرآیندی است که باعث حذف یا کشتن میکروارگانیسمها می‌گردد. این اصطلاح در موارد حذف یا خنثی‌سازی مواد شیمیایی و مواد پرتوزای خطرناک نیز به کار گرفته می‌شود.
استریلیزاسیون (Sterilization)
فرآیندی است که باعث از بین رفتن یا کشتن تمامی انواع میکروارگانیزم‌ها و اسپورها می‌گردد.
ضدعفونی (Disinfection)
یک راه فیزیکی یا شیمیایی برای کشتن میکروارگانیزم‌ها است ولی الزاما بر اسپورها اثر ندارد.

انواع پسماندهای آزمایشگاهی
1- پسماندهای معمولی یا بدون خطر
2- پسماندهای شیمیایی
3- پسماندهای عفونی
4- پسماندهای تیز و برنده عفونی و غیرعفونی
5- پسماندهای آسیب شناسی تشریحی
6- پسماندهای پرتوزا

1- پسماندهای بدون خطر
عبارت است از پسماندهایی که خطرات اساسی و زیان‌باری برای سلامت انسان یا محیط زیست ایجاد نمی‌کنند مانند پسماندهای شهری. این پسماندها به سه دسته جامد، گاز و مایع تقسیم می‌شوند که جامدات مانند روغن، کارتن، فلزات، پلاستیک، پارچه، یونولیت، ظروف شیشه‌ای سالم، ضایعات مواد غذایی و غیره هستند.
هر پسماند آزمایشگاهی آلوده که طبق اصول صحیح، سترون‌سازی شود، نیز در گروه پسماندهای معمولی قرار می‌گیرد. لازم به ذکر است که ضایعات شیشه‌ای شکسته و اجسام فلزی و پلاستیکی تیز و برنده در این گروه قرار نمی‌گیرند.
2- پسماندهای شیمیایی
شامل تمامی مواد و حلال‌های شیمیایی، محتویات کیت‌های آزمایشگاهی و معرف‌ها هستند. پسماندهای شیمیایی به دو دسته کم خطر و پرخطر تقسیم می‌شوند:
پسماندهای شیمیایی پرخطر عبارتند از آن دسته از مواد شیمیایی که یکی از ویژگی‌های زیر را دارا باشند:
قابلیت احتراق یا انفجار، فرسایندگی، واکنش‌زایی، سمی بودن، ناپایداری، سوزانندگی و سرطان‌زایی. در محل تولید یا مصرف این مواد باید فهرست یا جدولی تحت عنوان برگه اطلاعات ایمنی مواد شیمیایی (Material Safety Data Sheet= MSDS) که نشان دهنده خصوصیات فیزیکی و شیمیایی و همچنین اطلاعات ایمنی مربوط به هر یک از آنها است، تهیه شود.
مواد شیمیایی قابل احتراق
موادی مانند استون، الکل‌ها، پراکسیدها و نیتریت‌ها، گزیلول، بنزن، تولوئن و استالدئید که دمای احتراق کمتر از 60 دارند، در دسته مواد شیمیایی قابل احتراق قرار می‌گیرند.
مواد شیمیایی قابل انفجار
موادی مانند هیدرازین‌ها، اسیدپیکریک در شکل خشک شده و اتر که واکنش‌زا و ناپایدار هستند در این دسته قرار می‌گیرند. این مواد در فضای آزاد و فشار طبیعی به سرعت دچار تغییر شیمیایی می‌گردند.
مواد شیمیایی فرساینده
موادی مانند اسیدهای معدنی و بازهای قوی که دارای 5/12 PH و یا 2PH< بوده و می‌توانند سبب سایش آهن (استیل) به میزان بیشتر از 25/0 اینچ در سال در فشار اتمسفر و در 130 شوند، در این دسته قرار می‌گیرند.
مواد شیمیایی واکنش‌زا
موادی مانند پراکسیدها، سولفات‌ها، اکسید فسفر، هیدرید سدیم و منوکسید سدیم که از نظر شیمیایی ناپایدار بوده و آمادگی واکنش، به خصوص با آب را داشته باشند در این دسته قرار می‌گیرند.
مواد سرطان‌زا
سازمان جهانی بهداشت شاخص‌هایی را برای مشخص بودن مواد سرطان‌زا ارائه نموده است که خوانندگان جهت مطالعه بیشتر می‌توانند به منابع مربوطه مراجعه نمایند. مثال‌هایی از این مواد عبارتند از: بنزن، فرمالین، کلروفرم، فرمالدئید، اتیل کاربامات، تری کلرواتیلن، اتیدیوم برومید، کادمیم و ترکیبات آن، تتراکلرید کربن، دی کلروبنزن و دی کلرواتان.
مواد سمی
سرب و جیوه و ترکیبات آنها، کلشیسین، کافئین، آرسنیک، آنیلین، گلوتارآلدئید، سولفید هیدروژن، فنل سدیم آزاید، سیانید سدیم، فلورید سدیم، گزیلول، فلزات سنگین، بنیان‌های کلر و فلوئور و آفت‌کش‌ها در دسته مواد سمی قرار می‌گیرند. این مواد به دنبال استنشاق، بلع یا تماس پوستی حتی با مقادیر کم، اثرات زیان‌آور شدیدی ایجاد می‌نمایند.
حلال‌های هالوژن
شامل اتیلن کلرید کلروفرم، تتراکلرید کربن، تری کلرواتان، تری کلرواتیلن و هالوتان هستند.
مواد شیمیایی که در گروه‌های فوق قرار نمی‌گیرند، در گروه ضایعات شیمیایی کم خطر قرار دارند.

3- پسماندهای عفونی
آن دسته از پسماندهای آزمایشگاه که به یک عامل میکروبی آلوده باشند و بتوانند منشا آلودگی گردند، پسماند عفونی نامیده می‌شوند. این پسماندها شامل پسماندهای آسیب‌شناسی تشریحی، فرآورده‌های خونی انسانی و حیوانی، فرآورده‌های بیولوژیک (در مراکز تحقیقاتی و مدفوع، ادرار، مایعات و ترشحات مختلف بدن هستند. لازم به ذکر است که به دلیل اهمیت خاص، پسماندهای آسیب‌شناسی تشریحی در دسته‌ای مستقل مورد بحث قرار می‌گیرند.
4- پسماندهای تیز و برنده
پسماندهایی که به علت تیزی و برندگی می‌توانند موجب آسیب جدی و پارگی اعضای بدن گردند، در این گروه قرار می‌گیرند. با توجه به احتمال وجود آلودگی در محیط آزمایشگاه بریدگی با این اجسام ممکن است خطر انتقال عفونت را نیز به دنبال داشته باشد.
این دسته از پسماندها شامل سوزن‌ها، سرنگ‌ها، چاقوی جراحی، پیپت، لام و لامل و ظروف مصرفی و شیشه‌ای شکسته، مواد پلاستیکی، چوب و فلزات تیز و برنده می‌باشند. اگر چه این مواد می‌توانند در هر یک از انواع پسماندها و یا ترکیبی از آنها قرار گیرند اما در این راهنما در بخش مربوط به پسماندهای تیز و برنده عفونی شرح داده می‌شوند.
5- پسماندهای آسیب‌شناسی تشریحی
پسماندهای آسیب‌شناسی تشریحی در ادامه مورد بحث قرار می‌گیرند.
6- پسماندهای پرتوزا
هر نوع ماده جامد، مایع یا گاز که از خود پرتوهای یون‌ساز ساطع نماید، در دسته پسماندهای پرتوزا قرار می‌گیرد. انواع این پرتوها عبارتند از: آلفا، بتا، ایکس، الکترون‌های با سرعت بالا و سایر ذرات هسته‌ای. این پسماندها به اشکال مختلف مانند شیشه، پلاستیک، کاغذ، انواع مختلف محلول‌های شیمیایی، ادرار، مدفوع، خون، بافت، لاشه حیوانات، ظروف کشت سلولی، ایزوتوپ‌های پرتوزا و غیره دیده می‌شوند.

راهنمای اصول مدیریت پسماندهای معمولی
کلیات
پسماندهای معمولی در آزمایشگاه شامل موارد زیر هستند:
تمامی پسماندهایی که بدون آلودگی یا پسماندهای عفونی، شیمیایی و پرتوزا در آزمایشگاه تولید می‌گردد.
ظروف شیشه‌ای و پلاستیکی محتوی محلول‌های شیمیایی موجود در کیت‌ها، حلال‌ها و نشانگر پس از شست و شو
پسماندهای آلوده مانند ظروف محیط کشت و محتویات آن که مطابق اصول صحیح سترون‌سازی شده‌اند.
به حداقل رساندن ضایعات
همواره در هنگام طراحی یک برنامه مدیریت دفع پسماند باید روش‌های کاربردی را به منظور کاهش تولید پسماندهای معمولی در نظر گرفت.
جداسازی پسماندهای معمولی
در برنامه مدیریت پسماندها مهم‌ترین اولویت، جداسازی پسماندهای معمولی از پسماندهای شیمیایی، عفونی، پرتوزا و ضایعات برنده است. همچنین باید در این برنامه پسماندهای معمولی جامد مثل روزنامه، بطری‌ها، ورقه‌های آلومینیومی و غیره از پسماندهای غیرجامد جدا گردد. مواد برنده مشکوک به هر گونه آلودگی نیز در این مرحله جدا گردیده و مطابق بند مربوطه در این راهنما جهت دفع آماده می‌گردند.
بسته‌بندی و ذخیره‌سازی
این پسماندها در بسته‌های پلاستیکی به طور جداگانه بسته‌بندی و پس از ذخیره‌سازی در محل مناسب در حداقل زمان ممکن (روزانه) جهت تحویل به شهرداری آماده می‌شود.
آمایش نهایی پسماندهای معمولی
بسته‌های پلاستیکی حاوی پسماندهای معمولی پس از اینکه به شهرداری تحویل داده شد، با یکی از روش‌های دفن، تولید کمپوست و غیره آمایش می‌گردند.

فرمت این مقاله به صورت Word و با قابلیت ویرایش میباشد

تعداد صفحات این مقاله  75  صفحه

پس از پرداخت ، میتوانید مقاله را به صورت انلاین دانلود کنید

دانلود مقاله بررسی ایمنی زایی ژنهای L7/L12 و P39 در موشهای Balac

اختصاصی از فی ژوو دانلود مقاله بررسی ایمنی زایی ژنهای L7/L12 و P39 در موشهای Balac دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

هدف از این تحقیق بررسی ایمنی زایی ژنهای L7/L12 و P39 در موشهای Balac است. بنابراین پس از جداسازی و تکثیر ژنهای فوق مراحل زیر در این تحقیق انجام گرفت.
1- لکون نمودن ژنهای فوق در یک ناقل انتقال دهنده Cleaning vector
2- تعیین ترادف نوکلئوتیدی ژنهای جداشده و مقایسه آن با ژنهای L7/L12
3- کلون نمودن ژنها در پلاسمید بیان کننده پروکاریونی Procaryotic expression vector
4- تولید و تخلیص پروتئینهای L7/L12 و P39
5- کلون نمودن آنها در پلاسمید بیان کننده اوکاریوتی Eucaryotic expression vector
6- هاری کردن پلاسمیدهای فوق از آندوتوکسین
7- تزریق پلاسمیدها، بسویه واکنش و سویه بیماریزا بروسلاآبورتوس به موش Balb/C
8- سنجشهای ایمونولوژیک
باکتریها و پلاسمیدهایی که برای انجام این پایان نامه استفاده دشه اند بترتیب زیر می باشند:
باکتریها: بروسلاآبورتوس سویه های 19S و 544 اشدیشیالکی سویه
اشریشیالکی سویه BL21 – اشریشیاکی سویه BL21(DE3(Plyss
پلاسمیرها: PGEX4T1 – PRT 28a – SK+(pSK) - Pblue Script-PCDNA3
- جداسازی کروموزوم بروسلا آبورتوس 19S:
برای تکثیر ج داسازی ژنهای L7/L12 و P39 ابتدا کروموزوم باکتری جداسازی گردید.
مواد:
بافر TE:
Tris – Hel 10mm
EDTA 1.0mm
‍PH بافر را پس از تهیه برروی 8 تنظیم می نمائیم.
پروتئیناز K:

CTAB/NaCl:
Nacl 4.1gr
CTAB 10gr
DDW 100ml (Final Volume)
روش:
ابتدا محیط برنسط برات را تهیه و استریل نموده و ml5 از محیط را با بروسط آبورتوس سویه 19S تلقیح می نمائیم. پس 48 تا 72 ساعت باکتریها رشد کرده و کدورت مناسبی را پیدا می کند. بقیه مراحل تخلیص کروموزوم بشرح زیر است:
1- 5/1 میلی لیتر از سوسپاستیون فوق را مدت 2 دقیقه در rpm5000 سانتریفوژ می نمائیم. محلول رویی را دور می ریزیم.
2- Ml576 از بافر TE را بر روی رسوب باکتری اضافه کرده و رسوب را در بافر حل می نمائیم. سپس ml30 از SDS(10%) و ml3 از پروئیناز K (mg/ml20) را افزوده و بمدت یکساعت در دمای 0C37 نگهداری می نمائیم.
3- پس از مخلوز Ml100 از (M5)NaCl از محلول CTAB/NaCl بمیزان Ml80 اضافه کرده و بمدت 10 دققیق در 0C65 انکوبه می کنیم.
4- هم حجم مخلوط بالا از ترکیب کلروفرم – ایزوآمیل (1/24) به مخلوط افزوده و سپس از مخلوط بمدت 5 دقیقه در rpm10000 سانترفوژ می کنیم. محلول رویی را به لوله دیگر منتقل می نمائیم.
5- هم حجم محلول روئی ترمیب فنل – کلروفرم – ایزوآمیل (1/24/25) پس از مخلوط بمدت 5 دقیقه در vpr10000 سانتریفوژ کرده و محلول رویی به لوله دیگری منتقل می نمائیم.
6- هم حجم محلول روئی ایزوپروپانل اضافه نموده و مخلوط می کنیم. پس از چند دقیقه DNA کروموزومی ته نشین شده که می توان بات یک پیپت پاستور آنرا جمع آوری نمائیم.
7- رسوب DNA کروموزومی را با الکل 70% شستشو داده و پس از خشک شدن در مجاورت هوا در Ml100 از بافر TE حل می نمائیم.
بررسی کمی و کیفی DNA کروموزومی:
برای تعیین خلوط کروموزوم باکتری از مواد و وسایل زیر استفاده میشود.

1- بافر PBE pH=8(10X)
Tris – base 890mM
Boric Acid 890mM
EDTA 25mM
2- آگارز MP
3- تانک الکتروفورز افقی
روش:
ابتدا آگارز MP در بافر TBE(0.5x) را بکمک حرارت حل کرده و ژل آگارز افقی را سینی مخصوص تانک الکتروفورز افقی تهیه می نمائیم. سپس به مقدار Ml5 از DNA کروموزومی را در چلهک ژل ساخته شده ریخته و در تانک الکتروفورز حاوی بافر TBE(0.5x) پس از برقراری جریان الکتریکی مستقیم الکتروفورز می کنیم.
بریا تعیین مقدار DNA نیز پس از تهیه رقت تز کروموزوم DD آنرا در (Optimal Density) طول موج 260 نانومتر اندازه گیری می نمائیم. مقدار DNA بر اساس فرمول:عکس رقت 50 DD قرائت شده = مقدار DNA تعیین می گردد.
- مرحله پس از جداسازی کروموزوم تکثیر و جداسازی ژنهای مورد نظر است. این فرآیند با استفاده از دستگاه PCR انجام می گردد. در دستگاه PCR با استفاده از عوامل پایه ای، ژن مورد نظر را می توان با استفاده از آنزیم تک پلی مرآز Tag Polymerase تکثیر نمود. عوامل پایه ای ذکر شده شامل موارد ذیل است.
1- قالب
2- پرایمر جلو Forward
3- پرایمر عقب Revers
4- دروکسی نوکلئوتیدها LNTP
5- منیزیوم
6- بافر
7- آنزیم پلی مرآز
8- آب مقطر استریل
برای تهیه پرایمرها ابتدا باید آنها را طراحی کرد. برای طراحی پرایمرهای ژن L7/L12 و P39 ابتدا مترادف نوکلئوتیدی ژنهای فوق را از مرکز اطلاعاتی NCBI بدست می آوریم.
accession No(L7/L12). L27819
accession No(P39). L35038
سپس بر این اساس و درنظر گرفتن نکات استاندارد طراحی پرایمر از جمله طول پرایمر، دمای اتصال G+C%، تولید پرایمر، تولید لوپ یا حلقه و ... ترادف پرایمرهای تعیین میگردد. در این مرحله از آنالیزهای کامپیوتری توسط برنامه Dlogo و Blast استفاده میگردد.
ترادف ژن مورد نظر و پرایمرهای Forward و Reverse برای جداسازی ژنهای فوق از باکتری بروسلا به شرح زیر است:
1- پرایمرهای L7/L12
Forward:
5’ GGA AAT GCT GAT CTC GCA AA3’
Revers:
5’ CCA CTT GAG TTC AAC XTT GGC CA3’
2- پرایمرهای P39
Forward:
5’ GCC GGC GCC TGT TGC CAA 3’
Reverse:
5’ C CGC TTT TGC GGC TTC AA 3’
جهت سهولت مراحل کلونینگ و با توجه به محلهای ممکن برای کلون سازی در پلاسمیدهای حد واسط و پلاسمیدهای بیانی دو جایگاه آنزیمی BamHI و XhoI درابتدا و انتهای پرایمر طراحی شده است. پرایمرهای طراحی شده توسط شرکت MWG آلمان ساخته شد.
برای انجام PCR از دستگاه TECHNE(Cambridge) مدل BENIUS استفاده شده است. برای بهینه سازی تکثیر ژنهای ذکر شده غلظتهای مختلف یون منیزیم (از 5/1 تا 5/3 میلی مولار) و دماهای مختلف مناسب برای اتصال پرایمرها با DNA کروموزومی (66-63 درجه سانتیگراد) بکار رفته است.
- تائید ژنوم سنتز شده توسط PCR:
برای تایید صحت قطعه ژنوم بدست آمده از PCR از هضم آنزیمی ژنهای فوق استفاده می گردد. چنانچه از هضم آنزیمی ژن L7/L12 با آنزیمهای EC0RI و Hind III بترتیب قطعات (168+206) و (305+69) باید دیده شود و از هضم آنزیمی ژن P39 با آنزیمهای NEOL و Hind III بترتیب قطعات (136+560+709) و (553+652) باید دیده شود.
برای تایید نهایی صحت ژنهای تکثیر شده از نظر ماهیت و ترادف نوکلئوتیدی آنها، این ژنها ابتدا در ناقل pSK+ کلون گردید و سپس برای تعیین سکانس به شرکت مربوط ارسال گردید.
- کلونینگ ژنهای L7/L12 و P39 در کلونینگ pSK+:
برای کلونینگ ژنهای فوق ابتدا باید ژنها تحت اثر آنزیمهای BamHI و xhoI قرارگرفته، سپس ناقل پلاسمیدی pSK نیز با آنزیمهای اخیر برش داده شود.
1- برش آنزیمی ژنهای L7/L12 و P39 با آنزیمهای BamHI و xhoI.
2- برش آنزیمی پلاسمید pSK با آنزیمهای BamHI و xhoI پلاسمید pSK در حدود kb96/2 وزن دارد. این پلاسمید دارای یک ناحیه تکثیری ColE1، یک ناحیه مقاومت به آمپی سیلین تحریک ناحیه f1 origin و یک ناحیه بنام multiple cloning site=MCS که جایگاه تعدادی از آنزیمهای تحدیدی را در خود دارد. برای تکثیز پلاسمید فوق از باکتری اشدیشیاکلی استفاده می گردد.
3- برای برش آنزیمی این پلاسمید ابتدا باکتری حاوی این پلاسمید را تکثیر میدهد. در ضمن تکثیر باکتری پلاسمید مورد نظر در باکتری همانندسازی کرده و تعداد آن افزایش می یابد. برای تکثیر باکتری از کشت آن در ml2 محیط LB حاوی ng/ml50 آنتی بیوتیک آمپی سیلین استفاده می شود. پس از 18 ساعت کشت مورد نظر کدورت مناسب را پیدا میکند. پس از آن پلاسمید از باکتری تخلیص میگردد.
مواد:
1- SET buffer:
Sucrose 50mM
EDTA 10mM
Tris-Hcl pH 8 15mM
2- بافر لیزکننده:
Lysis Buffer (1ml)
Na OH (2N) 100ml
SDS (10%) 100ml
DDW 800ml
3- استات پتاسیم 5 مولار با pH 4.2
Potassiun Acetate 5M for 100ml
KAC (4M) 60ml
Acetic Acid 11.5ml
DDW 28.5ml
روش:
ابتدا 5/1 میلی لیتر از کشت 18 ساعت باکتری را با استفاده از سانتریفوژ با دور rpm4000 بمدت 5 دقیقه رسوب میدهیم. سپس رسوب بدست آمده را در 100ml از SET buffer کاملاً حل کرده بمدت 5 دقیقه در حرارت اتاق قرار می دهیم. پس از مدت فوق ml200 از محلول لیز بافر تازه تهیه شده را در رسوب سوسپانسیون فوق ریخته، بخوبی مخلوط کرده و بمدت 2 دقیقه در یخ قرار میدهیم. سپی ml150 از محلول KAC بر نخلوط فوق ریخته پس از مخلوط نمودن مجدداً بمدت 5 دقیقه در یخ میگذاریم.
جهت تفکیک پروتئینهای آزادشده سلولی از DNA پلاسمید ml450 از ترکیب فنل-کلروفرم – ایزوآمیل الکل (1/24/25) بر سوسپانسیون حاوی باکتریهای لیز شده افزوده و بمدت 5 دقیقه با دور rpm10000 سناتریفوژ می نمائیم. محلول رویی را در لوله دیگر ریخته و به آن یک میلی لیتر اتانل مطلق سرد می افزرائیم. سپس با استفاده از سانتریفوژ با دور rpm1000 بمدت 5 دقیقه DNA پلاسمیدی را رسوب میدهیم. DNA رسوب داده را با الکل 70% شستشو میدهیم. پس از خشک شدن رسوب در مجاورت هوا، در ml20 از بافر TE حل نموده و به آن ئم5 از آنزیم Rnase A(5mg/ml) برای حذف RNA موجود اضافه می کنیم و بمدت نیم ساعت در 0c37 قرار میدهیم. برای نگهداری پلاسمید از 0c20- استفاده میشود.
پس از تلخیص، پلاسمید از نظر کیفی و کمی سنجیده میشود. برای این منظور از روشی که قبلاً در مورد کروموزوم باکتری توضیح داده شد، استفاده میگردد.
- هضم آنزمی پلاسمید sPK:
پس از تعیین غلظت پلاسمیدهای خالص شده هضم آنزیمی آن با استفاده از آنزیمهای BamHI و xhoI صورت میگیرد.
pSK 5ml(10ng)
BamHI 1ml
xhoI 1ml
Baffer (y Lango) 2ml
DDW 21ml
Tota l 30ml
پس از مدت 2 ساعت انکوباسیون در دمای 0c37 برای اطمینان از غلظت و کیفیت نمونه هضم شده آنرا برروی ژل آگارز 8/0% بررسی می نمائیم.
- هضم آنزیمی ژنهای L7/L12 و P39:
ژنهای فوق را نیز نظیر پلامید pSK تحت اثر آنزیمهای BamHI و xhoI قرار می دهیم.
L7/L12 10ml P39 10ml
BamHI 1ml BamHI 1ml
xhoI 1ml xhoI 1ml
Baffer 2ml Baffer 2ml
DDW 21 DDW 21
total 30 total 30
- اتصال ژنهای L7/L12 و P39 با پلاسمید (Ligation preparation) PSK برای اتصال قطعات ژنی با پلاسمید PSK از آنزیم T4 DNA Ligale استفاده می شود.
L7/L12 10ml P39 10ml
PSK 2ml PSK 2ml
T4 DNA ligale 1ml T4DNA ligale 1ml
Baffer 1.5ml Baffer 1.5ml
DDW 0.5ml DDW 0.5ml
total 15ml total 15ml

مخلوط فوق را بمدت 16 ساعت در 0c14 قرار میدهیم.
- انتقال DNA نوترکیب به میزبان) E0ch (HHI
- برای انتقال DNA نوترکیب به سلولهای میزبان ) E0ch (HHI ابتدا باید سلولهای میزبانهای مورد نظر و آماده پذیرش DNA نوتکریب بنمائیم. Competent cell برای تهیه این سلولها از وش زیر استفاده می گردد.
مواد:
محیط SOB
SOB for 100ml
0.5% yeast extract
2% trypton
10mm Nacl
2.5mm Kcl
10mm Mgcl2
10mm MgSo4
پس از تنظیم pH برروی 7-7.2 تنظیم کرده و پس از آن اتوکلاو می کنیم.
بافر TFBI
TFBI (for 100ml)
KAC 30mm
MnCl2.4H2O 50mm
Kcl 100mm
Cacl2.2H2O 10mm
Glycerol 15ml
H2O Complete to 100ml
PH را برروی 8/5 تنظیم کرده و پس از آن با اتوکلاو استریل می نمائیم.
بافر TFBII
TFB II (for 100ml)
MOPS 10mm
Cacl2.2H2O 75mm
KCL 10mm
Glycerol 15ml
H2O Complete to 100ml
پس از مخلوط نمودن آنرا با اتوکلاو استریل می کنیم.
روش تهیه Competent Cell
100 میلی لیتر از محیط SOB را در یک ارلن یک لیتری تهیه کرده و اتوکلاو می نمائیم. به محیط فوق 1 میلی لیتر از کشت 18 ساعت
) E.col.(DH5را تلقیح می نمائیم. ارلن را برروی شبکه قرار داده و با دور rpm200 در دمای 0C37 قرار داده تا OD550nm به حدود 5/0 برسد. ارلن محتوی باکتری را بمدت نیم ساعت در یخ قرار داده و پس از آن بندت 10 دقیقه در دمای 0C4 در rpm1800 سانتریفوژ می کنیم. برروی رسوب بدست آمده 20 /میلی لیتر بافر TFB I اضافه کرده و به آرامی رسوب را در بافر حل نموده و بمدت 10 دقیقه در یخ می گذاریم. سوسپانسیون فوق را بمدت 10 دقیقه در 0C4 با دور rpm1800 سانتریفوژ کرده و به رسوب بدست‌آمده 2 میلی لیتر بافر FTB II افزوده بمدت 15 دقیقه در یخ قرار می دهیم. پس از این مدت ml100 از سوسپانسیون باکتری را در ایندرف 5/1 ریخته و آنرا در 0C70 نگهداری می نمائیم.
ترانسفورماسیون
مواد لازم:
- سلولهای Competent
- پلاسمید DNA نوترکیبی
- محیط کشت مایع نوترین برات
- پلیت حاوی محیط کشت نوترین آگار به همراه آمپی سیلین
- گرمخانه 0C37
روش کار:
1- سلولهای Comptent باکتری ) E.coli.(DH5 را از 0C70- بیرون آورده روی یخ قرار می دهیم تا باز شود.
2- مقدار ml10 از مخلوط پلاسمید نوترکیب شده در مرحله قبل، را به سلولهای Competent می افزائیم.
3- نمونه فوق را بمدت 30 دقیقه در یخ قرار میدهیم.
4- پس از زمان فوق اپندرف حاوی نمونه را بلافاصله در گرمخانه 0C37 بمدت 5 دقیقه قرار میدهیم.
5- مجدداً نمونه ها را بمدت 2 دقیقه در یخ قرار میدهیم.
6- مقدار ml800 محیط کشت نوترین برات به نمونه فوق اضافه کرده و بمدت یکساعت در 0C37 انکوبه مب کنیم.
7- پس از انکوباسیون، سوسپانسیون فوق را به پلیتهای حاوی نوترین آگار (محتوی Ng/cl60 آمپی سیلین) منتقل کرده و پلیتها را 18 ساعت در گرمخانه 0C37 قرار می دهیم.
- غربالگری
باکتریهای رشد یافته پس از ترانسفورماسیون در محییط نوترین برات آنتی بیوتیک کشت داده و پس از حدود 18 ساعت که کدورت محیط مناسب شد، پلامیت آنها را تخلیص می کنیم. پلاسمیدهیا تخلیص شده را برروی ژل آگارز 1% بررسی می نمائیم. پلاسمیدهائی که حاوی ژن مورد نظر باشند، حرکت کنتری دارند لذا از سایر پلاسمیدهای فاقد ژن قابل شناسایی می باشند. پس از شناسایی این باکتریها با انجام PCR و هضم آنزیمی پلاسمید با آنزیمهای BamHI و xhoI مورد تایید قرار می گیرند بطوریکه در PCR قطعه مورد نظر دیده شود و در هضم آنزیمی از پلاسمید خارج شود.
- تعیین ترادف نوکلئوتیدی قطعه مورد نظر:
پس از بدست آوردن کلون مو رد نظر، پلاسمیدها را پس از تخلیص برای تعیین ترداف نوکلئوتیدی به شرکت MWG ارسال نمودیم.
- کلون نمودن ژنها در پلاسمید بیان کننده پروکاریوتی:
برای تولید پروتئین نوترکیب از ژنهای L7/L12 و P39 به سه جزء اصلی نیاز است:
1- ناقل بیان کننده expression vector
2- قطعه ژن مورد نظر
3- میزبان
1- ناقل بیان کننده:
در این تحقیق از دو ناقل بیانی استفاده شده است. برای بیان ژن L7/L12از ناقل PET2800 و برای بیان ژن P39 از ناقل PGEX4T1 استفاده شده است.
PRT2800 از شرکت Novageh است. خصوصیات این پلاسمید بقرار زیر است:
الف: این ناقل دارای پروموتور فاژ T7 می باشد که تحت کنترل اپراتور Lac میباشد.
ب: در این ناقل برای افزایش میزان توجه، جایگاه اتصال به ریبوزوم تهبیه شده است.
ج: ترادف ویژه مربوط به 6 اسید آمینه هیستیدین در ناحیه ‘5 مکان کلونینگ ژن قرذار گرفته است.
د: دراین ناقل ناحیه ویژه ای برای آنزیمهای تحدیدی برای وارد کردن ژن تعبیه شده است.
و: ژن مربوط به مقاومت به کانامایسین
هـ: دارای ترادف لازم برای همانندسازی پلاسمید
پلاسمید PGEX4T1 از شرکت فارماسیا یم باشد. خصوصیات این پلاسمید بقرار زیر است:
الف: این ناقل دارای پروموتور تریپتونان است که تحت کنترل اپراتور Lac می باشد.
ب: در این ناقل ربای افزایش میزان ترجمه، جایگاه اتصال به ریبوزوم تعبیه شده است.
ج: ترادف ویژه مربوط به آنزیم گلوتایتون S ترانفرآز که در ناحیه ‘5 مکان کلونینگ ژن قرار گرفته است.
د- در این ناقل ناحیه ویژه ای برای آنزیمهای تحدیدی جهت کلون نمودن ژن تعبیه شده است.
و- ژن مربوط به مقاومت آمپی سیلین
هـ - ترداف لازم برای همانندسازی پلاسمید.
- سویه E.coli میزبان: سویه های E.coli نظیر با دارا بودن پروتئازها باعث شکسته شدن پذوتئینهای نوترکیب می گردند. از این نظر برای تولید پروتئینهای نوترکیب از سویه هایی استفاده می شود که فاقد آنزیمها باشند. در این تحقیق برای بیان ژن در ناقل PET280 از سویه BL21(DE3)Plyss و برای بیان آن در ناقل PGEX4T1 از سویه BL21 استفاده میشود.
برای کلون نمودن ژنهای L7/L12 و P39 در ناقل بیان کننده مراحل زیر انجام می شود:
1- استخراج قطعه ژنهای مورد نظر از ناقل PSK
2- برش آنزیمی ناقلهای بیان کننده
3- اتصال دو قطعه DNA
4- انتقال DNA نوترکیب به میزان ) E.coli.(DH5
5- غربالگری
1- استخراج قطعه ژنهای مورد نظر از ناقل PSK
برای این منظور ابتدا باکتریهای حاوی کلونهای PSK-L7/L12 و
PSK-P39 را در محیط مایع نوترین برایت حای آنتی بیوتیک کشت داده و پس از تخلیص پلاسمید با کمک هضم آنزیمی با دو آنزیم BamHI و xhoI را انجام داده و قطعه ژنی بریده شده مورد نظر را از روی ژل خالص می کنیم که در اینجا در کیت Roche استفاده شده است.
مواد لازم:
- آنزیمهای BamHI و xhoI
- ژل آگارز 8/0% استخراج ژن
- محلولهای لازم برای تخلیص پلاسمید
روش کار:
1- در دو لوله حاوی 2 میلی لیتر از محیط نوترین برات حاوی آمپی سیلین از کلون حاوی PSK-L7/L12 و PSK-P39 تلقیح کرده و بمدت 18 ساعت در
0C37 انکوبه می نمائیم.
2- استخراج پلاسمیدها به روشی که قبلاً ذکر گردید.
3- هضم آنزیم پلاسمید با آنزیمهای BamHI و xhoI که بصورت زیر انجام میگردد:
PSK-L7/L12 5ml
BamHI 1ml
XhoHI 1ml
Baffer (y-tango) 4ml
DDW 9ml
Total 20ml

PSK-P39 5ml
BamHI 1ml
XhoHI 1ml
Baffer (y-tango) 4ml
DDW 9ml
Total 20ml
سپس بمدت 2 ساعت در 0C37 انکوبه می نمائیم.
4- ژل آگارز 1% را با چاهکهای بزرگ را تهیه کرده و سپس پلاسمیدهای هضم شده را در این چاهکها ریخته و در تانک افقی الکتروفورز می نمائیم. پس از الکتروفوروز، ژل را با اتیدیوم برماید رنگ آمیزی کرده و قطعه ژن های جدا شده از پلاسمید را با امواج V18 با طول موج بالا مشاهده و از روی ژل آگارز با تیغ اسکالیل برداشت میکنیم.
5- استخراج قطعه DNA از ژل آگارز با استفاده از کیت Roche کیت استخراج DNA طوری طراحی شده که تهیه و تخلیص DNA از روی ژلهای آگارز را بخوبی امکان پذیر میسازد و نیازی به تخلیص DNA با فنل و رسوب دادن آن با اتانل نمی باشد.
ذرات Silica بکار رفته در این کیت طوری بهینه شده است که قطعات خیلی کوچک DNA براحتی و با مقدار زیاد می توانند به این ذرات اتصال یابند و مجدداً آزاد گردند. در طی مرلحل شستشو دیگر اجزاء اسید نوکلئیک شامل آگارز پروتئینها و اتیدیوم برماید حذف خواهد شد. پس از استخراج DNA از ذرات Silica، DNA محلول در بافر TE و یا آب بدست آید.
روش کار:
قطعه برش بافته از آگارز حاوی ژن مورد نظر را وزن نموده و به ازای هر mg100 از ژل ml300 از بافر شماره 1 به ژل آگارز افزوده و به این مخلوط ml10 از Silica اضافه می نمائیم. پس از بهم زدن بمدت 15 دقیقه در 0C56 انکوبه کرده و در هر 2 تا 3 دقیقه بشدت مخلوط را بهم می زنیم.
نمونه را بمدت 30 ثانیه سانتریفوژ کرده و بدقت سیوپ رویی را جدا می کنیم رسوب را ml500 بافر شماره 2 شتستشو را
2- برش آنزیمی ناقلهای بیان کننده:
- در شرایط استریل از باکتری E.coli. حاوی ناقل PET28a برداشت کرده و در 2 میلی لیتر از محیط نوترین برات حاوی Ng/ml کانامایسین کشت میدهیم. بهمین ترتیب از باکتری E.coli. حاوی ناقل PGEX4T1 نیز برداشت کرده و در 2 میلی لیتر از محیط نوترین برات حاوی Ng/ml50 آمپی سیلین کشت میدهیم. سپس باکتریها را در الکوباتور شیکردار 0C37 بمدت 18 ساعت قرار میدهیم.
- به روشی که برای تخلیص پلاسمید ذکر شد، ناقلها را تخلیص می کنیم.
- هضم آنزیمی ناقلهای فوق را با استفادهع از آنزیمهای BamHI و xhoI بروش زیر انجام میدهیم
PET 28a 5ml PGEX4T1 5ml
BamHI 1ml BamHI 1ml
XhoI 1ml xhoI 1ml
Baffer(ytango) 4ml Baffer(ytango) 4ml
DDW 9ml DDW 9ml
Total 20 total 20
- پس از مخلوط کردن، نمونه ها را بمدت 2 ساعت در 0C37 قرار میدهیم.
3- اتصال دو قطعه DNA به یکدیگر:
برای اتصال ژن L7/L12 با ناقل PET28a و ژن P39 با ناقل PGEX41T1 از آنزیم T4 DNA ligase استفاده میشود.

PET 28a 1m1 PGEX4T1 1m
L7/L12 6ml p39 6ml
T4 DNA ligale 1ml T4 DNA ligale 1ml
Baffer 1ml Baffer 1.5ml
DDW 3.5ml DDW 3.5ml
Total 15ml total 15ml
سپس نمونه های فوق را بمدت 16 ساعت در دمای 0C14 قرار میدهیم.
14- انتقال DNA نوترکیب به میزان ) E.coli.(DH5
برای انتقال DNA نوترکیب به میزان ) E.coli.(DH5 از سلولهای Competetnt میزبان فوق که قبلاً تهیه شده بود، استفاده گردید. روش انتقال DNA نوترکیب قبلاً شرح داده شد.
5- غربالگری:
پس از انجام مرحله ترنسفورماسیون حاوی DNA نوترکیب را غربال می کنیم روش غربالگری قبلاً در همین فصل شرح داده شده است.
3- تولید و تخلیص پرئتئینهای L7/L12 و P39
همانطور که قبلاً ذکر شد پروتئینهای نوترکیب L7/L12 و P39 در سویه هایی از E.coli انجام گرفته است که حداقل تولید پروتئازها را دارند. بهمین دلیل برای تولید پروتئین L7/L12 از میزبان E.coli BL21(DE3)plyss و برای تولید پروتئین P39 از میزبان E.coli Bl21 استفاده دشه است. مراحل تولید پروتئین های فوق به شرح زیر است.
1- تهیه Competent cell از باکتریهای E.coli B121(DE3) PLySS (مقاوم به کارآمفنیکل) و E.coli BL21 : برای تهیه این سلو.ل از روشی که قبلاً در همین بخش ذکر شده، استفاده گردیده است.
2- تخلیص پلاسمیدهای L7/L12 PET 28a-و P39 PGEX4T1- از میزبان
) E.coli.(DH5: تخلیص پلاسمیدهای فوق با استفاده از روشی که توضیح داده شده، انجام گرفته است.
3- انتقال پلاسمیدهای فوق به میزبانهای ذکر شده در بند 1: ترانسفورماسیون پلاسمیدهای فوق در میزبانها مطابق روشی است که قبلاً ذکر شده است.
4- القاء: 5- آنالیز محصول القاء SDS PAGE
بیان پروتئینهای نوترکیب، با انتقال ناقل نوترکیب به سلول میزبان و رشد سلولهای ومیزبان و القاء تولید پروتئین صورت میگیرد.
پروموتورهای استفاده شده در مهندسی ژنتیکی دو دسته هستند.
دسته اول پروموتورهای دائمی که همواره فعال بوده و پروتئین نوترکیب را تولید می کنند و دسته دوم پروموتورهای القایی که در زمانی فعال خواهند بود که مهار از روی آنها برداشته شود.
القاء بیان پروتئین نوترکیب در ناقلهای PET28a و PGEX4T1 با استفاده از پروموتورهای القایی بوده که تحت کنترل اپراتور Lac هستند. بدین ترتیب که با افزودن ترکیب IPIG (isoprogyl - B-D-Thiogalctoside) القاء و تولید پروتئین صورت میگیرد. بدین ترتیب که IPTG به پروتئین سرکوب کننده اپراتور Lac متصل شده، آنرا غیرفعال میسازد. پس از آن RNA پلی مرازهای سلولی ترادف نوکلئوتیدی پائین دست است پروموتور را شناسایی کرده و رونویسی آغاز میگردد. سپس mRNA رونویسی شده به پروتئین نوترکیب توجه میگردد.
مواد لازم برای القاء:
- محیط کشت نوترین برات
- آنتی بیوتیکهای کانامایسین و آمپی سیلین
- محلول یک مولار IPTG
روش کار:
1- ابتدا در 2 میلی لیتر از محلول نوترین برات حاوی آنتی بیوتیکهای کانامایسین و کارآمفنیکل از E,cili BL21(DE3) Plyss حاوی
L7/L12 PET 28a- و در 2 میلی لیتر از محیط نوترین برات حاوی آمپی سیلین E.coli BL21 حاوی PGWX4T1-P39 کشت میدهیم. سپس بمدت 18 ساعت در گرمخانه 0C37 برروی شیکر قرار میدهیم.
2- در دو ارلن یک لیتری مجزا (یک الرلن دارای کانامایسین و کلرآمفنیکل و دیگری حاوی آمپی سیلین) از کشتهای فوق تلقیح می نمائیم. ارلن ها را در گرمخانه 0C37 برروی شیکر قرار میدهیم – دور شیکر باید حداقل rpm170 باشد.
3- در این مرحله پس از اینکه کشت سلوطل در DD600 بمقدار 6/0 رسید و قبل از القاء یک نمونه (در حدود 5/1 میلی لیتر) از محیط کشت برداشت کرده و رسوب سلولی آنرا با سانتریفوژ (8000 دور بمدت 5 دقیقه) بدست می آوریم. این رسوب سلولی را نمونه قبل از القاء نامگذاری می کنیم (Before induction=BI) و در 0C20- نگهداری می شود.
4- القاء بیان ژن را با اضافه کردن IPIG انجام میدهیم بطوریکه غلظت نهایی آن در کشت سلولی به یک میلی مولار برسد.
5- برای مدت 4 تا 5 ساعت کشت سلولها در دمای 0C37 روی شیکر قر ار می دهیم این زمان برای القاء و همچنین حداکثر بیان پروتئین نوترکیب لازم است.
6- پس از این زمان، نمونه دوم (در حد 5/1 میلی لیتر) برداشته و آنرا بعنوان نمونه بعد از القاء درنظر میگیریم. رسوب آنرا تهیه کرده و در 0C20- نگهداری می کنیم.
7- بقیه نمونه های بعد از القاء را سانتریفوژ (30 دقیقه در rpm4000) کرده و رسوب را برای تخلیص پروتئینها در 0C70- نگهداری می نمائیم.
5- آنالیز محصول بعد از القاء با SDS PAGE
برای بررسی نتیجه القاء نمونه های قبل از القاء و بعد از القاء باید بوسیله ژل الکتروفورز SDS PAGE بررسی نمائیم.
مواد و وسایل لازم برای SDS PAGE
1- تهیه ژل 15%
2- بافر x5 (هنگام استفاده به بافر x1 رقیق شود.)
3- تانک الکتروفورز
4- منبع نیرو
5- Loading buffer
6- رنگ آمیزی ژل DSD PSGE
7- تهیه ژل 15%
برای تهیه ژل 15% به مواد زیر نیاز داریم
1- آکریل آمید – بیس Acrl 30% bis 0.8%
آکریل آمید 30 گرم
بیس 8/0 گرم
ایندو را با هم مخلوط کرده و با آب مقطر به حجم 100 میلی لیتر میرسیانیم و و محلول را در شیشه های تیره در 4 درجه سانتیگراد نگه میداریم.
2- تریس هیدروکلراید PH 8.8 Tris.cl/SDS PH 8.8
تریس Tris base 1/9 گرم
آب مقطر 30 میلی لیتر
PH این محلول را به 8/8 می رسانیم و سپس با استفاده از آب مقطر حجم آنرا به 50 میلی لیتر میرسانیم، سپس مقدار 2/0 گرم سدیم دودسیل سولفتات (SDS) به آن می افزائیم.
3- تریس هیدروکلراید PH 6.8 tris.cl/SDS PH 6.8
تریس 05/6 گرم
آب مقطر 40 میلی گرم
ابتدا ایندو را مخلوط کرده و PH آنرا به 8/6 میرسانیم سپس با آب مقطر حجم آنرا به 100 میلی لیتر رسانده و مقدار 4/0 گرم دودسیل سولفات (SDS) به آن افزوده در 0C4 نگداری می کنیم.
3- آمونیم پرسولفات 10% Ammunium persulfate 10%
آمونیم پرسولفات 1 گرم
آب مقطر 10 میلی لیتر
4- بافر الکتروفورز x5
تریس Tris base 15 گرم
گلیسین 12 گرم
سدیم دودسیل سولفات 5 گرم
حجم را با استفاده از آب مقطر به 1000 میلی لیتر می رسانیم.
روش کار تهیه ژل SDS PAGE
ابتدا صفحات شیشه ای و اسپیسرها را با الکل تمیز می کنیم. اسپیسرها در کناره های جانبی دو شیشه قرار داده و با گیره بخوبی محکم می کنیم سپس بوسیله آگار یک درصد انتهای دو شیشه را به بطور عمودی هستند را بخوبی مسدود می کنیم. پس از تهیه محلول Resolving به آرامی با استفاده از یک پیپت یا ستور از یک گوشه شیشه و در حد فاصل دو شیشه محلول Resolving را میریزیم و حدود باقیمانده از بالای شیشه را برای ریختن محلول Stacking خالی نگه میداریم. بلافاصله برروی محلول Resolving آب یا ایزوبوتانل ریخته تا از مجاورت با اکسیژن دور بماند. پس از اینکه ژل Resolving بخوبی بست، ایزوبوتانل را خالی کرده سطح ژل آب مقطر شسته و آنرا با کاغذ صافی خشک می کنیم. بعد از آن محلول Stacking را افزوده و شانه را که از قبل با الکل شسته شده است در حد فاصل دو شیشع درون محلول staking قرار میدهیم. پس از اینکه Staking نیز بصورت ژل درآمد، صفحات شیشه ای حاوی ژل را در داخل تانک حاوی بافر 1x قرار داده و شانه را به آرامی خارج میکنیم. در چاهکهای ایجاد شده نمونه های آماده شده (جوئشانده در Liading buffer) را اضافه کرده، تانک را به منبع نیرو و مل نموده و دستگاه را روی ولتاژ مناسب تنظیم می کنیم. پس از گذشت زمان لازم که براساس ولتاژ و اندازه ژل متفاوت است، باندهای پروتئینی برروی ژل تفکیک میشود. برای مشخص شدن باندها را رنگ آمیزی میکنیم.
DS gel – loading buffer
Tris.cl pH 6.8 50mm
Dithiotheritol 100mm
SDS 2%
Bromophenol 10.%
Glycerol 10%
- رنگ آمیزی ژلهای الکتروفورز SDS PAGE
معمولاً دو روش رنگ آمیزی استفاده میشود:
رنگ آمیزی نقره و رنگ آمیزی کماسی
رنگ آمیزی نقره زمان بیشتری را به خود اختصاص داده اما روشی حساس است که میتواند غلظت پروتئین 1 تا 5 نانوگرم را مشخص نماید.
روش کماسی سریعتر و ساده تر است ولی حساسیت آن کنتر از رنگ آمیزی نقره است و حدود 40 تا 50 نانوگرم حساسیت دارد.
در این پایان نامه از روش کماسی استفاده شده است.
مواد لازم برای رنگ آمیزی کماسی
1- محلول کماسی

فرمت این مقاله به صورت Word و با قابلیت ویرایش میباشد

تعداد صفحات این مقاله   63صفحه

پس از پرداخت ، میتوانید مقاله را به صورت انلاین دانلود کنید

پایان نامه ایمنی معادن زغال سنگ در ایران

اختصاصی از فی ژوو پایان نامه ایمنی معادن زغال سنگ در ایران دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

مطالب این پست : دانلود متن کامل پایان نامه ایمنی معادن زغال سنگ در ایران 139 صفحه

رشته ایمنی و بازرسی فنی

رشته معدن

فهرست مطالب

 

عنوان صفحه

چکیده             1

مقدمه 2

فصل اول ـ آشنـایی بـا زغال سنگ و بـررسی اهمیت آن در بـازار و جهان

1 ـ 1 ـ آشنایی          5

1 ـ 2 ـ چگونگی تجمع مواد گیاهی      5

1 ـ 3 ـ چگونگی تبدیل مواد گیاهی به زغال      7

1 ـ 4 ـ مشخصات زغال           9

1 ـ 4 ـ 1 ـ خاکستر    9

1 ـ 4 ـ 2 ـ مواد فرار   9

1 ـ 4 ـ 3 ـ ارزش حرارتی       9

1 ـ 4 ـ 4 ـ خواص کک دهی   10

1 ـ 5 ـ انواع زغال سنگ         10

1 ـ 6 ـ آشنایی با زغال سنگ و مسائل آن         12

1 ـ 7 ـ اهمیت زغال و مقایسه آن با سایر منابع انرژی     17

1 ـ 8 ـ تکنولوژی های بهره برداری از زغال سنگ          20

1 ـ 9 ـ تاریخچه زغال سنگ در ایران     22

1 ـ 10 ـ زمین شناسی زغال سنگ در ایران      23

1 ـ 11 ـ مقدار ذخایر زغالی ایران        25

1 ـ 12 ـ منابع و ذخایر زغال سنگ ایران          26

1 ـ 13 ـ نهشته های زغال سنگ جهان 32

فصل دوم ـ حادثه و تحلیل آن            44

2 ـ 1 ـ حادثه از دیدگاه قانون   44

2 ـ 2 ـ حادثه از دیدگاه ایمنی 44

2 ـ 3 ـ طبقه بندی حوادث در معادن زغال سنگ          45

2 ـ 4 ـ جمع حادثه ساز و پیشگیری به عمل آورده        47

2 ـ 5 ـ ایمنی در معادن زغال سنگ ایران چگونه است ؟ 49

2 ـ 6 ـ شرح حوادثی که در معادن کرمان ( معدن باب نیزو ) منجر به کشته شدن چند نفر شده و توضیح علل حوادث           50

2 ـ 6 ـ 1 ـ گزارش حادثه 28/5/1372 کارگاه 57 تونل 1 معدن باب نیزو         50

2 ـ 6 ـ 2 ـ مشخصات کارگاه 77 در لایه 16   50

2 ـ 7 ـ پیشنهاد مناسب جهت کاهش میزان حوادث       51

2 ـ 8 ـ عواملی که باعث خطر وقوع حادثه در معدنکاران بر حسب گروه سنی می شود. 52

2 ـ 9 ـ عواملی که باعث خطر وقوع حادثه در معدنکاران بر حسب سابقه کار می شود. 53

2 ـ 10 ـ عوامـلی که بـاعث خـطر وقوع حادثه در معدنکاران آمـوزش ندیده می شود.53

2 ـ 11 ـ عـواملی که بـاعث خـطر وقوع حادثه در معدنکاران آمـوزش دیده می شود.54

2 ـ 12 ـ عواملی که باعث تقلیل وقوع حادثه می شود.    54

فصل سوم ـ تکنیک ایمنی در معدن زغال

3 ـ 1 ـ مسائل کلی مربوط به حفاظت کار و مقررات ایمنی         57

3 ـ 2 ـ خدمات مقررات ایمنی در معدن           57

3 ـ 3 ـ وظایف اصلی معاون مهندس کل           57

3 ـ 4 ـ حمل و نقل افراد در طول گالری های معدنی      58

3 ـ 5 ـ مقررات ایمنی به هنگام انتقال افراد در گالری های افقی   59

فصل چهارم ـ قوانین ایمنی در معادن زغال سنگ

4 ـ 1 ـ سرویس کنترل و مراقبت         61

4 ـ 2 ـ باز کردن مناطقی که در آنها آتش سوزی خاموش شده    61

4 ـ 3 ـ نظم و ترتیب کارهای منطقه آتش سوزی          62

4 ـ 4 ـ پرسنل کارهای انفجاری 62

4 ـ 5 ـ مواد انفجاری مورد استفاده        63

4 ـ 6 ـ رساندن مواد منفجره به محل کار          64

فصل پنجم ـ خطرات و عوامل مخرب و زیان بار در معادن

5 ـ 1 ـ آشنایی          66

5 ـ 2 ـ خطرات برق     68

5 ـ 3 ـ سیستم حمل و نقل     68

5 ـ 4 ـ خطرات معدن کاری     69

5 ـ 5 ـ خطرات ماشین آلات    70

5 ـ 6 ـ سر و صدا در معادن     71

5 ـ 7 ـ گاز رادون در معادن      71

5 ـ 7 ـ 1 ـ آشنایی     71

5 ـ 7 ـ 2 ـ پیدایش    72

5 ـ 7 ـ 3 ـ خطرات رادون       72

5 ـ 7 ـ 4 ـ واحدهای اندازه گیری        73

5 ـ 8 ـ آتشباری         74

5 ـ 8 ـ 1 ـ آشنایی     74

5 ـ 8 ـ 2 ـ آتشباری در سنگ 74

5 ـ 8 ـ 3 ـ آتشباری در زغال   75

5 ـ 9 ـ آتش گرفتن گاز متان    76

5 ـ 9 ـ 1 ـ منابع آتش           76

5 ـ 10 ـ انفجار گرد زغال        77

5 ـ 11 ـ خودسوزی     82

5 ـ 12 ـ سایر خطرات معادن زیر زمینی زغال   87

5 ـ 12 ـ 1 ـ کنترل طبقات     87

5 ـ 12 ـ 2 ـ ماشین آلات       89

5 ـ 12 ـ 3 ـ ایمن سازی حمل بار       89

5 ـ 12 ـ 4 ـ حمل و نقل افراد  90

5 ـ 12 ـ 5 ـ پیاده رفتن افراد   90

فصل ششم ـ راه های پیشگیری از وقوع خطرات و حوادث در معادن

6 ـ 1 ـ پیش گیری و خاموش کردن آتش سوزی معدن   92

6 ـ 1 ـ 1 ـ قواعد کلی 92

6 ـ 1 ـ 2 ـ پیش گیری از بروز آتش سوزی های زیر زمینی به علت خودسوزی زغال 93

6 ـ 1 ـ 3 ـ خاموش کردن آتش سوزی های زیر زمینی   93

6 ـ 2 ـ احتیاطات عمومی        94

6 ـ 3 ـ استفاده از آب در معادن           96

6 ـ 4 ـ آب و هوای زیر زمینی   97

6 ـ 4 ـ 1 ـ آشنایی     97

6 ـ 4 ـ 2 ـ دمای هوا   97

6 ـ 4 ـ 3 ـ رطوبت      97

6 ـ 4 ـ 4 ـ سرعت هوا           98

6 ـ 4 ـ 5 ـ اثر مجموعه دما ، سرعت و رطوبت   98

6 ـ 4 ـ 6 ـ کنترل آب و هوا    99

6 ـ 5 ـ جدا کردن و تصفیه گرد و غبار در زیر زمین       102

6 ـ 5 ـ 1 ـ آشنایی     102

6 ـ 5 ـ 2 ـ مراکز تولید گرد و غبار       103

6 ـ 5 ـ 3 ـ روش مکشی         103

6 ـ 5 ـ 4 ـ تصفیه گرد و غبار   105

6 ـ 5 ـ 5 ـ صافی های پارچه ای         107

6 ـ 5 ـ 6 ـ صافی های استوانه ای       107

6 ـ 5 ـ 7 ـ نصب ماشین آلات 109

6 ـ 6 ـ آتشباری با تزریق آب    109

6 ـ 7 ـ آمپول های آب برای آتشباری    114

6 ـ 8 ـ تزریق آب       115

6 ـ 8 ـ 1 ـ عملی بودن این روش        116

6 ـ 8 ـ 2 ـ تزریق آب در جبهه کار طولانی       117

6 ـ 9 ـ پیدایش گازها   117

6 ـ 10 ـ تشخیص گازها          119

فصل هفتم ـ چگونگی رعایت مسائل ایمنی

7 ـ 1 ـ ایمنی شخصی و تجهیزات ایمنی          122

7 ـ 1 ـ 1 ـ آشنایی     122

7 ـ 1 ـ 2 ـ محافظت گوش      122

7 ـ 1 ـ 3 ـ محافظت چشم      123

7 ـ 1 ـ 4 ـ ماسک گرد و غبار   124

7 ـ 1 ـ 5 ـ ماسک انفرادی       124

7 ـ 1 ـ 6 ـ دستکش    125

7 ـ 1 ـ 7 ـ چکمه      125

7 ـ 1 ـ 8 ـ لباس       125

7 ـ 1 ـ 9 ـ نوبت کاری و اثر آن بر ایمنی و تندرستی کارکنان     126

فصل هشتم ـ آتش سوزی های زیر زمینی و تشریح عملیات اطفاء حریق در تونل بیست معادن کارمزد

8 ـ 1 ـ آشنایی          130

8 ـ 2 ـ ویژگی های حریق زیر زمینی     130

8 ـ 3 ـ راه های اطفاء حریق های زیر زمینی      131

8 ـ 4 ـ نحوه عملیات اطفاء حریق در تونل بیست           132

8 ـ 5 ـ شرح عملیات اطفاء حریق         132

8 ـ 6 ـ علت آتش سوزی         134

8 ـ 7 ـ مشکلات در حین اطفاء حریق    135

نتیجه گیری     137

پیشنهادات      138

منابع و مآخذ    139

فهرست اشکال

1 ـ 1 . مراحل مختلف تبدیل مواد گیاهی به انواع مختلف زغال

1 ـ 2 . هیستوگرام عرض جغرافیایی با مساحت برابر برای نهشته های زغال سنگ جهان

1 ـ 3 . سهم منابع مختلف انرژی ( به درصد ) در تامین انرژی کل برای ایالات متحده از سال 1960 و 1980

1 ـ 4 . پراکندگی جغرافیایی رسوبات زغال دار ایران

1 ـ 5 . گستره جغرافیایی حوضه زغال دار البرز

1 ـ 6 . مکان جغرافیایی منابع مهم زغال سنگ جهان و مسیر تحرکات تجاری کشورهای صادر کننده عمده زغال سنگ

1 ـ 7 . مکان جغرافیایی منابع زغال سنگی در خاور میانه ، اتحاد جماهیر شوروی و آسیا

1 ـ 8 . مکان جغرافیایی منابع زغال سنگی عمده و نواحی تامین کننده در استرالیا

1 ـ 9 . محل منابع زغال سنگ در اروپا

1 ـ 10 . محل منابع عمده و نواحی تامین زغال سنگ در افریقای جنوبی

5 ـ 1 . نقش استفاده از پودر سنگ در کاهش انفجارها

6 ـ 1 . نمودار دمای مؤثر

6 ـ 2 . آتشباری با برش زیرین ( برش و مقطع عمودی )

6 ـ 3 . روش خرد کردن و جدا کردن سینه کار با چال های در امتداد مختلف

6 ـ 4 . آتشباری زغال در جا و استخراج نشده

6 ـ 5 . تبدیل چال های سینه کار به چال بلندی که پیشاپیش سینه کار و به موازات آن حفر می شود.

6 ـ 6 . آمپول مسدود شونده خودکار

6 ـ 7 . افزایش تولید عناصر فعال بر حسب افزایش رنگ زغال سنگ

7 ـ 1 . نمودار حوادث افراد در شیفت های مختلف

7 ـ 2 . نمودار حوادث در ساعات مختلف شبانه روز

فهرست جداول

1 ـ 1 . تقسیم بندی زغال سنگ در ایران

1 ـ 2 . نمودار انواع گیاهان مختلف در ارتباط با سن زمین شناختی نوع نهشته زغال سنگی و تاثیرهای اقلیمی

1 ـ 3 . مقدار گوگرد موجود در مواد مختلف به درصد وزنی

1 ـ 4 . سلسله مراتب تکنولوژی های بهره برداری از زغال سنگ

1 ـ 5 . مجموع ذخایر زغالی ایران

1 ـ 6 . ذخایر و نوع زغال سنگ در کرمان تا سال 1374 بر اساس گزارش شرکت ملی فولاد ایران

1 ـ 7 . ذخایر و نوع زغال سنگ در طبس تا سال 1374 بر اساس گزارش شرکت ملی فولاد ایران

1 ـ 8 . ذخایر و نوع زغال سنگ در منطقه البرز مرکزی تا سال 1374 بر اساس گزارش شرکت ملی فولاد ایران

1 ـ 9 . ذخایر و نوع زغال سنگ در منطقه البرز شرقی تا سال 1374 بر اساس گزارش شرکت ملی فولاد ایران

1 ـ 10 . ذخایر و نوع زغال سنگ در منطقه البرز غربی تا سال 1374 بر اساس گزارش شرکت ملی فولاد ایران

1 ـ 11 . منابع زغال سنگ جهان بر حسب درصد از کل منابع جهانی

2 ـ 1 . حوادث مرگبار

2 ـ 2 . کلیه حوادث معدن زغال سنگ آمریکا در سال 1977

5 ـ 1 . خطرات محیط کار و آسیب های احتمالی

5 ـ 2 . غلظت پودر سنگ لازم در حالت های مختلف

8 ـ 1 . میزان استخراج سالیانه معادن کارمزد در سال 1378

8 ـ 2 . ترکیب هوای معدن در زمان آتش سوزی